为什么DNA文库可以直接用于原核生物的目的基因筛选,而不能用于真核生物的目的基因筛选?真核生物的目的基因筛选常用的方法是什么?
为什么DNA文库可以直接用于原核生物的目的基因筛选,而不能用于真核生物的目的基因筛选?真核生物的目的基因筛选常用的方法是什么?
正确答案:由于真核生物基因组十分庞大,因此要求构建基因文库的库容量要足够大,才能筛选到某一目的基因。细胞中的mRNA分子数要比基因组的基因数小得多(通常大约仅有15%左右基因被表达)。由mRNA逆转录为cDNA,那么所构建的cDNA文库的库容量相应比基因文库小。真核生物的基因含有内含子,在原核生物细胞中不能表达,但筛选到的cDNA克隆只要附上原核生物的调节和控制序列,就能在原核细胞内表达。常用方法:cDNA文库筛选,mRNA反转录后PCR体外扩增,DNA合成等。